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黄曲霉毒素B1

产品类别:免疫亲和柱
发布日期:2014-08-20 13:15:33
规格型号:ZYD-HQMDSB1
商 家:北京智云达科技股份有限公司

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产品说明供应商信息配置清单

黄曲霉毒素B1免疫亲和柱操作说明书

【概要】

黄曲霉毒素(Aflatoxin)是黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物,被世界卫生组织的癌症研究机构划分为1类致癌物,同时又是一种毒性极强的剧毒物质,广泛存在于各种食物中。玉米,花生,大米,小麦等谷物及其副产品是黄曲霉毒素的主要来源,同时饲料中的黄曲霉毒素B1经过动物代谢后产生的黄曲霉毒素M1仍然具有很强的毒性和致癌性,也广泛存在牛奶,血液,组织等食品中。黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一,也是诱发胃癌,肠癌等疾病的主要原因之一,对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品,饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。


【适用范围及性能】

用于定性、定量检测谷物、副食品、酒类等食品和饲料等样本中的黄曲霉毒素总量B1时的样品前处理。

柱容量:≥200ng

回收率:≥90%


【试验原理】

本产品的测定的基础是抗原抗体反应,黄曲霉毒素B1单克隆抗体连接在柱内凝胶上,样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和层析柱,在免疫亲和柱内,毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1,然后注入到分析仪器中用于检测。


【包装组成】

根据不同规格,每一个盒中包含5-25支黄曲霉毒素免疫亲和层析柱及1份说明书。


【需要而未提供的设备及试剂】

设备:

┅┅高速均质器或组织匀浆机

┅┅粉碎机

┅┅200ml/50ml量筒

┅┅天平:感量0.1g

┅┅微量移液器:单道 100l~1000l

┅┅槽纹滤纸(折叠快速定性或定量滤纸)

┅┅玻璃微纤维滤纸(1.5m孔径)

┅┅50ml漏斗

┅┅一次性玻璃试管

┅┅泵流操作架(包括空气泵,不同容积的玻璃注射器等)

试剂:

┅┅甲醇(色谱级)

┅┅蒸馏水或去离子水

┅┅pH7.0磷酸盐缓冲溶液(PBS):称取8.0g氯化钠,1.2g磷酸氢二钠,0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾,用990mL纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0,最后用纯水稀释至1000mL

┅┅吐温-20/PBS溶液(0.1%):取1mL吐温-20,加入PBS缓冲溶液并定容至1000mL

【试剂配制】

样品提取液:根据不同的样品配置不同浓度的甲醇水溶液,作为样品提取液。


【样本处理步骤】

(一)花生,玉米,大米,小麦及其制品,植物油脂和饲料

┅┅取25g粉碎的样品(植物油脂直接取样,无需处理)与125mL甲醇-水(7:3)溶液混合;

┅┅加入5.0g氯化钠以均质器高速搅拌,提取2分钟;

┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;

┅┅取15mL滤液并加入30mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤,取稀释后液体待测;

┅┅将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL样品提取液注入玻璃注射器;

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;

┅┅以10.0mL水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;

┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。


(二)酱油

┅┅取50g试样与100mL甲醇-水(8:2)溶液混合;

┅┅加入2.5g氯化钠以均质器高速搅拌,提取1分钟;

┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;

┅┅取10mL滤液并加入40mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤

┅┅取稀释后液体待测;

┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;

┅┅用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗,再以10.0mL水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;

┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。


(三)食醋

┅┅取5g试样,加入1.0g氯化钠;

┅┅以pH7.0磷酸盐缓冲溶液稀释定容至25.0mL;

┅┅4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;

┅┅取10mL滤液并加入10mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤

┅┅取稀释后液体待测。

┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器;

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;

┅┅用10.0mL 0.1%的吐温/PBS清洗,再以10.0mL水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;

┅┅准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。


【结果判定】

经免疫亲和柱净化后,收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测,也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1mL洗脱液中的黄曲霉毒素B1含量相当于1g样品中黄曲霉毒素B1含量。


【高效液相参考谱图】


【注意事项】

┅┅黄曲霉毒素危害极大,应戴手套操作。

┅┅使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用5%浓度次氯酸钠溶液浸泡过夜。

┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。


【贮藏条件及保存期】

贮藏条件:亲和柱可于常温保存,2-8℃储存可延长有效期,不可冻存

保存期:该产品有效期为12个月。




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