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黄曲霉毒素M1

产品类别:免疫亲和柱
发布日期:2014-08-20 13:29:20
规格型号:ZYD-HQMDSM1
商 家:北京智云达科技股份有限公司

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产品说明供应商信息配置清单

黄曲霉毒素M1免疫亲和柱操作说明书

【概要】

黄曲霉毒素(Aflatoxin)是黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物,被世界卫生组织的癌症研究机构划分为1类致癌物,同时又是一种毒性极强的剧毒物质,广泛存在于各种食物中。玉米,花生,大米,小麦等谷物及其副产品是黄曲霉毒素的主要来源,同时饲料中的黄曲霉毒素B1经过动物代谢后产生的黄曲霉毒素M1仍然具有很强的毒性和致癌性,也广泛存在牛奶,血液,组织等食品中。黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一,也是胃癌,肠癌等疾病的主要原因,对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品,饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。2010年6月1日开始施行的乳品安全国家标准中对乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的检测进行了规定,主要使用的样品前处理方法就是免疫亲和柱净化法。


【适用范围及性能】

用于定性、定量检测牛奶,奶粉,发酵乳,干酪,奶油等样品中黄曲霉毒素M1的样品前处理。

柱容量:≥200ng

回收率:≥90%


【试验原理】

本产品的测定的基础是抗原抗体反应,黄曲霉毒素M1单克隆抗体连接在柱内凝胶上,样品中的黄曲霉毒素M1经过提取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢的通过黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱,在免疫亲和柱内,毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素M1,然后注入到分析仪器中用于检测。


【包装组成】

根据不同规格,每一个盒中包含5-25支黄曲霉毒素免疫亲和层析柱及1份说明书。


【需要而未提供的设备及试剂】

设备:

┅┅高速均质器或组织匀浆机

┅┅粉碎机

┅┅200mL/50mL量筒

┅┅天平:感量0.1g

┅┅酸度计

┅┅分液漏斗

┅┅微量移液器:单道 100L~1000L

┅┅槽纹滤纸(折叠快速定性或定量滤纸)

┅┅50mL漏斗

┅┅旋转蒸发仪

┅┅一次性玻璃试管

┅┅泵流操作架(包括空气泵,不同容积的玻璃注射器等)

┅┅烧杯,容量瓶,锥形瓶等

试剂:

┅┅甲醇(色谱级)

┅┅乙腈(色谱级)

┅┅石油醚

┅┅蒸馏水或去离子水

┅┅氢氧化钠溶液(0.5mol/L)称取2g氢氧化钠溶解于100mL水中


【样本处理步骤】

(一)牛奶

┅┅将100mL牛奶水浴加热至40 oC;

┅┅4000r/min离心15min,收集50mL清澈液待用


(二)乳粉和粉状婴幼儿配方食品

┅┅称取10g奶粉样品,将100mL50 oC水多次少量加入,搅拌,使奶粉充分溶解

┅┅6000r/min离心15min,收集50mL清澈液待用


(三)发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)

┅┅称取60 g混匀的试样,用0.5 mol/L 的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH至7.4;

┅┅用高速均质器在 9500 转/分钟下告诉匀浆5 min

┅┅水浴加热至40 oC;

┅┅4000r/min离心15min,收集50mL清澈液待用


(四)干酪

┅┅称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g置于50 mL离心管中,加2 mL水和30 mL甲醇;

┅┅用高速均质器在 9500r/分钟下告诉匀浆5 min;

┅┅超声提取30 min;

┅┅在6000r/分钟下离心15 min,收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。

┅┅在分液漏斗中加入30 mL石油醚(4.3),振摇2 min;

┅┅待分层后,将下层移于50 mL烧杯中,弃去石油醚层。

┅┅重复用石油醚提取2次;。

┅┅将下层溶液移到100 mL圆底烧瓶中,减压浓缩至约2 mL;┅┅浓缩液倒入离心管中,烧瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗涤,洗涤液一并倒入50 mL离心管中;

┅┅加水稀释至约50 mL,在6000 转/分钟下离心 5 min,上清液供净化处理。


(五)奶油

┅┅称取5g试样,置于50 mL烧杯中;

┅┅用20 mL石油醚将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。

┅┅加20 mL水和30 mL甲醇,振荡30 min后,将全部液体移于分液漏斗中;

┅┅待分层后,将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中,在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5 mL,加水稀释至约50mL,供净化处理。


【亲和柱净化步骤】

┅┅将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL清澈液注入玻璃注射器;

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;

┅┅在注射器中加入10ml水,调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。

┅┅准确加入1mL色谱级乙腈洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。


【结果判定】

经免疫亲和柱净化后,收集到的乙腈洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测,也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1ml洗脱液中的黄曲霉毒素含量相当于10ml牛奶样品、发酵乳样品或者1g奶粉样品、干酪样品和奶油样品中黄曲霉毒素M1的含量。

如果HPLC检测需要其它溶剂,可以将乙腈洗脱液氮气吹干,然后复溶


【注意事项】

┅┅黄曲霉毒素危害极大,应戴手套操作。

┅┅使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡过夜。

┅┅不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。


【贮藏条件及保存期】

贮藏条件:亲和柱可于常温保存,2-8℃储存可延长有效期,不可冻存。

保存期:该产品有效期为12个月。










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