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凝聚胺法交叉配血标准操作规程

2015-12-08 10:24:04 来源:实验室资讯网 浏览:

    1. 原理

    凝聚胺(polymatching)法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,促进血清(浆)中的抗体与红细胞相应抗原结合,再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液,中和红细胞表面的负电荷,缩短细胞间距,形成可逆的非特异性聚集,并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后,仅由凝聚胺引起的非特异性聚集,会因电荷中和而分散,而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。

    2. 标本采集:

    2.1 标本种类:抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清,将细胞配成5%盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。

    2.2 标本要求:抗凝和干燥管均可,如用抗凝血主张用EDTAK2(mg/dz)抗凝标本应无溶血,切标签齐全。

    3. 标本储存:急诊标本30分钟内完成操作,标本应至4℃冰箱保存7天。

    4. 标本运输:室温运输。

    5. 标本拒收标准:细菌污染。溶血标本,标签不齐全不能作测定。

    6. 试剂:

    6.1 试剂名称:凝聚胺试剂(polymatching)

    6.2 试剂生产厂家:(台资)珠海贝索生物技术有限公司。

    6.3 试剂组成:

    试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium,LIM).试剂打开使用后,可置室温贮存,未开封者2-10度贮存,有效期为2年。

    试剂2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。

    试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。

    试剂4. 8.5%生理盐水。

    7. 仪器:

    7.1 血型血清索离心机:XTL-4.7 上海离心机械研究所

    7.2 离心机:上海手术器械厂

    7.3 电热恒温水箱:北京长源实验设备厂

    7.4 显微镜:OLYMPUS(日本)

    8. 操作步骤及结果判断:

    8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5%的细胞悬液。加样量均为:血清2滴,红细胞悬液1滴。主管:受血者血清+供者红细胞悬液;次管:受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。

    8.2 各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴,混匀,置室温15秒。

    8.3 1000g(3000rpm),离心18秒,弃上清液,管底保留约2滴液体。轻摇

    试管,观察是否形成凝块。如未形成凝块,则重做前面试验。

    8.4 加入2滴重悬液,轻轻混合,肉眼或显微镜下观察结果。

    8.5 凝块在1分钟内分散,试验结果为阴性,供受者血液配合;反之,如依照为不同强度的凝块,试验结果判为阳性,供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。

    9. 操作性能: 快速简便,特异性强,灵敏度较高,重复性好。

    10. 超出范围结果处理:

    10.1 细胞自凝: 在冬天气温较低时,某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动,观察结果。

    10.2 若病人血清(血浆)含有肝素,如洗肾患者能影响配血,须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。

    10.3 红细胞悬液为5%为宜,过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当,反应不明显易误判。

    10.4 各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集,部分溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体。

    11. 方法局限性:

    11.1 试管,滴管吸头和玻片必须清洁干燥,防止溶血。

    11.2 操作方法应按规定,先加血清,然后再加红细胞悬液,以便容易核实是否漏加血清。

    11.3 离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。

    11.4 观察时应注意红细胞呈特异性凝集,继发性凝固及线状排列的区别。


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